RIPA lüüsipuhver (nõrk)

 

Toote nimi	Kass. Ei.	Spec.
RIPA lüüsipuhver (nõrk)	G2033-30ML	30 ml
	G2033-100ML	100 ml

 

 

RIPA Lysis Buffer on traditsiooniline kiire lüüsi lahus rakkudele ja kudedele. See on saadaval mitmesugustes ravimvormides ja liigitatakse tugevaks, keskmiseks või nõrgaks. Kudede ja rakkude lüüsimisel RIPA nõrga lüüsi lahustes saadud valguproove saab kasutada rutiinsetes PAGE, Westerni ja muudes katsetes, kus valgu aktiivsus ei ole rangelt nõutav. See toode sisaldab 50 mM Tris-HCl (pH 7,4), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA-2Na, 0,25% naatriumdesoksükolaati ja 1% NP-40. See sobib loomade või taimede kudede ja rakkude jaoks, kuid seda saab kasutada ka seente või bakterite proovide jaoks.

 

 

Laev märja jääga; Hoida 2-8 kraadi valgusest eemal; Kehtib 12 kuud.

 

 

 

Komponent	G2033-30ML	G2033-100ML
RIPA lüüsipuhver (nõrk)	30 ml	100 ml
Käsiraamat		1 tk

 

 

Vajab isevarustavaid proteaasi inhibiitoreid. Proteaasi inhibiitorid (G2006, G2007, G2008 jne) tuleks lisada RIPA Lysis (nõrk) enne kasutamist, et vältida valkude lagunemist. Kõik viited RIPA lüsaadile (nõrk) järgmistes juhistes on lisatud proteaasi inhibiitoritele.

• Koeproovide puhul:

1. Koetükke pestakse eeljahutatud PBS-ga (soovitatav G4202), et eemaldada vereplekid, lõigatakse väikesteks tükkideks ja asetatakse homogenisaatorisse.

2. Lisage 10-kordne koe maht RIPA lüüsipuhvrit (nõrk) ja homogeniseerige madalal temperatuuril (soovitatav on kasutada kiiret koe lihvimisseadet KZ-III-F ja KZ-III-FP, mis on sõltumatult välja töötatud ja toodetud Servicebio poolt). Pange tähele, et RIPA lüüsipuhvri (nõrk) kogust võib lisada vahekorras umbes 50 mg kudet 1 ml lüsaadi kohta. Kui koevalgu sisaldus on madal, võib lüsaadi kogust vähendada, et suurendada valgu kontsentratsiooni toorekstrakti lahuses.

3. Viige homogenaat 1,5 ml tsentrifuugi katsutisse ja võngutage. 30 minutit jäävanni korduva pipetiga iga 10 minuti järel, et tagada koerakkude täielik lüüs.

4. Tsentrifuugige 12000 xg 5 minutit ja koguge supernatant valgu üldlahusena.

• Adherentsete rakuproovide puhul:

1. Peske rakke PBS-ga 2-3 korda ja aspireerige jääkvedelik põhjalikult viimasel korral.

2. Aspireerige RIPA lüüsipuhver (nõrk) rakukultuuri plaadile ja kolbi vahekorras 250 μL rakulüsaati 6-süvendi plaadi süvendi kohta, raputage kultuuriplaati ja kolbi korduvalt, et lüsaat puutuks täielikult kokku lahtrid 3-5 min.

3. Kraapige rakud kaabitsaga maha ja koguge tsentrifuugituubi.

4. Lüüsige jääl 30 min.

5. Tsentrifuugige 12000 xg juures 5 minutit ja koguge supernatant valgu üldlahusena.

• Suspensioonirakkude proovide puhul:

1. Tsentrifuugige rakkude kogumiseks.

2. Segage tsütosool RIPA lüüsipuhvriga (nõrk) vahekorras 250 μL lüsaati 6-süvendi plaadi rakusüvendi kohta ja loksutage.

3. Jäävanni 30 minutit, pipeteerides korduvalt iga 10 minuti järel, et tagada rakkude täielik lüüs.

4. Tsentrifuugige 12000 xg 5 minutit ja koguge supernatant valgu üldlahusena.

• Bakterite või seente proovide puhul:

1. Võtke 1 ml suspensiooni, tsentrifuugige supernatandi eemaldamiseks ja peske üks kord PBS-ga, et vedelik täielikult eemaldada. Bakteri võimalikult laiali hajutamiseks segage keerisega.

2. Lisage 100-200 μL RIPA lüüsipuhvrit (nõrk) ja segage lüsaadiga hästi segunemiseks.

3. Jäävanni 30 minutit, pipeteerides korduvalt iga 2 minuti järel, et tagada rakkude täielik lüüs.

4. Tsentrifuugige 12000 xg 5 minutit ja koguge supernatant valgu üldlahusena.

 

 

1. Kude või rakud võivad lüüsimisel tunduda viskoossed. Seda on võimalik saavutada korduvalt pipetiga puhudes või keerisega loksutades, kuni see on vedel. Lisage veel sobiv kogus lüüsilahust, kui see jääb paksuks.

2. See reaktiiv ei sisalda proteaasi inhibiitoreid. Enne kasutamist lisage oma proteaasi inhibiitorid. Soovitatavad on G2006, G2007, G2008 ja teised meie ettevõtte sarnased proteaasi inhibiitorid.

3. Oma ohutuse ja tervise huvides kandke kaitseprille, kindaid või kaitseriietust.

 

Ainult uurimistööks kasutamiseks!

 

 

Kuum tags: ripa lüüsi puhver (nõrk), Hiina ripa lüüsi puhver (nõrk) tootjad, tarnijad, tehas