Hiire genotüübi määramise komplekt

See komplekt sisaldab kiire lüüsipuhvrit hiire saba, varvaste, kõrvade jaoks ja PCR segu genotüpiseerimiseks. Lüüsitoode ei vaja genoomi ekstraheerimist ja puhastamist ning seda saab kasutada otse PCR amplifikatsiooni mallina. Seda on lihtne kasutada, see kahjustab hiirt vähe ja nõuab väga tõhusa genotüpiseerimise, väljalangemise tuvastamise ja transgeeni tuvastamise saavutamiseks vaid väikese koguse koeproove.

2 × Mouse Genotyping PCR Mix (+Dye) sisaldab DNA polümeraaside, dNTP-de kõrget inhibeerimist ja kiiret amplifitseerimist ning optimeeritud puhversüsteemi, mis tagab otsese amplifikatsiooni kõrge efektiivsuse ja spetsiifilisuse. See sobib sihtgeeni amplifikatsiooniks kuni 2 Kb.

Ladustamise ja saatmise tingimused

Tarnida märja jääga; Hiire genotüpiseerimise lüüsipuhver Säilitada 4 kraadi juures; Ülejäänud komponente hoitakse temperatuuril -20 kraadi, kehtivusaeg on 12 kuud.

Malli ettevalmistamine

1. Valmistage lüüsilahus

a: Hiire genotüpiseerimise lüüsipuhver Madalal temperatuuril paistab valge sade. Inkubeerige enne kasutamist 37 kraadi juures 2-3 min, kuni valge sade kaob, see ei mõjuta kasutamist.

2. Segage õrnalt ja tsentrifuugige koheselt.

3. Võtke 1-3 mm sabaots,2-3 mm läbimõõduga (perforeeritud) hiirekõrv ora2-3 mm varvas (välja arvatud küüne pikkus), lisage ühe proovi lüsaat lüüsitav proov, inkubeerige 50 kraadi juures 10 minutit ja 95 kraadi juures 3 minutit täielikuks lüüsimiseks.

4. Tsentrifuugige lüüsitud koeplokki kiirusel 12000 p/min 1 minut katseklaasi põhja ja supernatanti saab kasutada otse PCR reaktsiooni matriitsina. Supernatanti võib üle kanda teise steriilsesse EP-sse ja asetada pikaajaliseks säilitamiseks -20 kraadini.

Soovitatav PCR reaktsioonisüsteem (20 μL):

a: Matriitsi annus ei tohi ületada 1/10 reaktsioonisüsteemist.

b: Praimeri lõppkontsentratsioon oli {{0}}.5-1.0 μM. Soovitatav praimeri kontsentratsioon on 0,5 μM. Liiga vähe praimereid võib põhjustada madala amplifikatsioonisaagise või amplifikatsiooni puudumise ning liiga palju praimereid võib viia mittespetsiifilise amplifikatsioonini.

5. Soovitatavad PCR amplifikatsiooni tingimused:

1. Enne reaktiivi kasutamist segage see õrnalt tagurpidi. Ärge mullide vältimiseks keerutage ega võngu.

2. Proovivõtjat loputatakse pärast proovide võtmist korduvalt 2% naatriumhüpokloriti lahusega, et vältida erinevate proovide vahelist ristsaastumist.

3. Kude tuleks lõigata väikesteks tükkideks, et lõhestamine oleks piisav.

4. Hiire genotüpiseerimise lüüsipuhvrit A ja hiire genotüpiseerimise lüüsipuhvrit B tuleks kasutada nii, nagu need on ette valmistatud, ja neid ei tohi pärast segamist liiga kauaks jätta, vastasel juhul mõjutab see lüüsiefekti.

5. Kui koeplokki on raske lüüsida, võib lüüsiaega 50 kraadi juures pikendada 20 minutini.

6. Pärast lüüsi jääb EP torusse mittetäielik lüüsikude, mis on normaalne nähtus ega mõjuta kasutamist.

Kuum tags: hiire genotüpiseerimiskomplekt, Hiina hiire genotüpiseerimiskomplekti tootjad, tarnijad, tehas